Prøveforberedelse:
Prøvesamling: Saml prøver såsom blod, væv, spyt og urin i henhold til formålet med eksperimentet.
DNA -ekstraktion: Brug et dedikeret DNA -ekstraktionssæt til at ekstrahere DNA fra prøven.
PCR -reaktionsforberedelse:
Designprimere: Designspecifikke primerpar baseret på målsekvensen til amplifikation af skabelon -DNA.
Forbered reaktionsblanding: inklusive skabelon -DNA, primere, buffer, DNA -polymerase, DNTP'er (deoxynucleosid -triphosphater), Mg 2+ osv.
Indstil PCR -program:
PCR -instrumentindstillinger: Indtast de forudindstillede PCR -cykelparametre, såsom 95 graders forvarmningstemperatur, denatureringstemperatur (såsom 95 grader), annealingstemperatur (såsom 55 grader), forlængelsestemperatur (såsom 72 grader) og antal cykler.
PCR -reaktion:
Tilføj prøve: Tilsæt reaktionsblandingen til PCR -reaktionstanken eller -chippen, og hver prøve har normalt en reaktion godt.
Udfør PCR: PCR -instrumentcyklusserne i henhold til det forudindstillede program, herunder opvarmning, afkøling, annealing og udvidelsestrin.
Produktanalyse:
Afkøling efter amplifikation: Efter at PCR er afsluttet, afkøles prøven kort med 4 grader.
Elektroforetisk adskillelse: Brug gelelektroforese -teknologi, såsom agarosegelelektroforese, til at adskille PCR -produkter i forskellige længder.
Fluorescensscanning: fluorescerende mærket primere udsender lys af en bestemt bølgelængde i det amplificerede produkt, og PCR -instrumentet læser disse signaler og registrerer dem.
Databehandling og fortolkning:
Dataanalyse Software: Brug specialiseret software til at analysere det fluorescerende signal og beregne koncentrationen eller den relative koncentration af målfragmentet.
Resultatfortolkning: Baseret på PCR -kurven og basislinjen skal du bestemme, om PCR er vellykket, om målfragmentet findes, og hvor meget det er.
Resultatoptagelse og konservering:
Registrer resultaterne i den eksperimentelle rapport og bevar de originale data og prøver korrekt.